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細菌脂多糖(LPS)elisa檢測試劑盒
細菌脂多糖(LPS)elisa檢測試劑盒
品牌:原鑫生物
貨號: YX-121619B
規格:48T/96T
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細菌脂多糖(LPS)elisa檢測試劑盒

細菌脂多糖(LPS)elisa檢測試劑盒圖1

酶聯免疫吸附劑測定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)是酶免疫測定技術中應用最廣的技術。1971年瑞典學者Engvail和Perlmann,荷蘭學者Van Weerman和Schuurs分別報道將免疫技術發展為檢測體液中微量物質的固相免疫測定方法,即酶聯免疫吸附測定法 (enzyme-linked immunosorbent assay , ELISA) 。ELISA已成為分析化學領域中的前沿課題 ,它是一種特殊的試劑分析方法,是在免疫酶技術( immunoenzymatic techniques ) 的基礎上發展起來的一種新型的免疫測定技術。


ELISA 的基礎是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標記。結合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學活性,酶標記的抗原或抗體既保留其免疫學活性,又保留酶的活性。在測定時,受檢標本(測定其中的抗體或抗原)與固相載體表面的抗原或抗體起反應。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復合物與液體中的其他物質分開。

再加入酶標記的抗原或抗體,也通過反應而結合在固相載體上。此時固相上的酶量與標本中受檢物質的量呈一定的比例。加入酶反應的底物后,底物被酶催化水解或氧化還原反應而成為有色產物,產物的量與標本中受檢物質的量直接相關,故可根據呈色的深淺進行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高,間接地放大了免疫反應的結果,使測定方法達到很高的敏感度。所生成有色產物的顏色深淺與欲測的抗原(抗體)含量成正比。 這種有色產物可用肉眼、光學顯微鏡、電子顯微鏡觀察,也可以用分光光度計(酶標儀)加以測定。其方法簡單,方便迅速,特異性強。


人脂多糖(LPS)ELISA檢測試劑盒實驗原理

用純化的抗體包被微孔板,制成固相載體,往包被抗該指標抗體的微孔中依次加入標本或標準品、生物素化的抗該指標抗體、HRP標記的親和素,經過徹底洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的該指標呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),計算樣品濃度。


細菌脂多糖(LPS)elisa檢測試劑盒圖2

人脂多糖(LPS)ELISA檢測試劑盒標本的采集及保存

1. 血清:全血標本請于室溫放置2小時或4過了夜后于1000 x g離心20分鐘,取上清即可檢測,或將標本放于-20或-80保存,但應避免反復凍融。

2.血漿:可用EDTA或肝素作為抗凝劑,標本采集后30分鐘內于2 - 8° C 1000 x g離心15分鐘,或將標本放于-20或-80保存,但應避免反復凍融。

3.細胞培養物上清或其它生物標本:1000 x g離心20分鐘,取上清即可檢測,或將標本放于-20或-80保存,但應避免反復凍融。

注:標本溶血會影響最后檢測結果,因此溶血標本不宜進行此項檢測。


細菌脂多糖(LPS)elisa檢測試劑盒圖3

人脂多糖(LPS)ELISA檢測試劑盒操作步驟

1、 取出試劑盒,于室溫(20-25)放置15-30分鐘。實驗過程應在室溫(20-25)內進行。

2、 取出酶標板,按照標準品的次序分別加入50μl的標準品溶液于空白微孔中。

3、空白微孔中加入50μl的樣品,空白對照加入50μl的蒸餾水;

4、 在樣品孔中加入10μl的生物素;(不含空白對照孔,切忌:生物素只加樣品孔!)

5、在各孔中加入100μl的酶標記溶液;(不含空白對照孔)

6、將酶標板用封口膠密封后,37孵育反應 1小時;(在孵育箱中保持穩定的溫度與濕度)

7、 充分清洗酶標板3-5次,保持各孔有充足的水壓;(濃縮洗滌液以1:100的比例與蒸餾水稀釋)

8、酶標板洗滌后用吸水紙徹底拍干;

9、各孔加入顯色劑A、B液各50μl;(不含空白對照孔)

10、各孔加入50μl終止液,終止反應;10、20-25下避光反應15分鐘;


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